㈠培養(yǎng)基標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定

培養(yǎng)基的規(guī)范制備是微生物檢驗(yàn)中最基礎(chǔ)流程其一。當(dāng)采用脫水培養(yǎng)基和別的成份時(shí)，尤其是哪些包含毒性成分如膽鹽或別的選擇劑的成份，應(yīng)遵循制造廠商給予的優(yōu)秀實(shí)驗(yàn)室明文規(guī)定和情況說(shuō)明。中.海培養(yǎng)基制備不合理會(huì)造成培養(yǎng)基產(chǎn)生品質(zhì)問(wèn)題，如含瓊脂培養(yǎng)基不凝固、酸堿值沒有在標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定范圍內(nèi)、滅菌后顏色變深等。

當(dāng)采用中海脫水合成培養(yǎng)基制備培養(yǎng)基時(shí)，應(yīng)嚴(yán)格遵守制造廠商給予的情況說(shuō)明做好制備。如凈重和體型\酸堿值值\制備時(shí)間\滅菌標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定和操作流程步驟等。實(shí)驗(yàn)室采用各種基本成分制備培養(yǎng)基時(shí)，應(yīng)準(zhǔn)確無(wú)誤依照配料配方做好制備，并記載相關(guān)信息及資料，如：培養(yǎng)基的命名和類型\試劑級(jí)別\各成份的成分含量/制造廠商/批號(hào)/酸堿值值/培養(yǎng)基的體型/無(wú)菌措施包括實(shí)施方法/溫度和時(shí)間/配置時(shí)間/人員等，用于追溯。

㈡培養(yǎng)基用水

實(shí)驗(yàn)用水的電導(dǎo)率在二十五度時(shí)不可高于二十五μS/cm，等同于電阻率≥0.4μω/c㎡，除了另有明文規(guī)定。水的微生物污染不可高于103CFU。依據(jù)GB4789.2菌落總數(shù)，應(yīng)采用平板計(jì)數(shù)瓊脂培養(yǎng)基，在三十六度(±1)培養(yǎng)四十八小時(shí)(±2)做好按時(shí)微生物污染查驗(yàn)。

㈢稱重融解培養(yǎng)基

準(zhǔn)確無(wú)誤稱重所需求量的脫水合成培養(yǎng)基。必需時(shí)戴上口罩或在通風(fēng)柜中實(shí)際操作，以預(yù)防吸進(jìn)包含有毒物質(zhì)的培養(yǎng)基粉末。先添加適量的水，完全混合，防止中'海培養(yǎng)基結(jié)塊，隨后兌水至所需求量，適度進(jìn)行加熱，頻繁或持續(xù)拌和，使其快速分散化。如有需要，應(yīng)完全徹底融解。含瓊脂的培養(yǎng)基應(yīng)當(dāng)在進(jìn)行加熱前泡浸數(shù)分鐘。

㈣培養(yǎng)基酸堿值測(cè)定調(diào)控

用酸堿值計(jì)測(cè)定酸堿值，必需時(shí)在滅菌前做好調(diào)控。除了另有明文規(guī)定，滅菌后培養(yǎng)基降溫至二十五度時(shí)，酸堿值應(yīng)在標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定酸堿值0.2范圍之內(nèi)。通常采用濃度為40 g/L（約1摩爾每升）的氫氧化鈉溶液或濃度為約36.5 g/L（約1摩爾每升）的鹽酸溶液來(lái)調(diào)控培養(yǎng)基的酸堿值。假如滅菌后需要調(diào)節(jié)，請(qǐng)采用滅菌或滅菌溶液。

㈤分開包裝培養(yǎng)基

將準(zhǔn)備好的培養(yǎng)基分開包裝到適度的器皿中，器皿的體型應(yīng)起碼比培養(yǎng)基大二十倍。

㈥培養(yǎng)基滅菌消毒

應(yīng)利用濕熱或過(guò)濾滅菌對(duì)培養(yǎng)基做好滅菌消毒。有很多培養(yǎng)基無(wú)法或不用高壓滅菌，可以采用煮沸滅菌。例如某些培養(yǎng)基如SC肉湯中包含對(duì)光和熱敏感的成分，煮沸后應(yīng)快速降溫，遮光儲(chǔ)存。有很多實(shí)驗(yàn)試劑可以不經(jīng)過(guò)滅菌就直接采用。

高壓滅菌器或中海培養(yǎng)基配制設(shè)施中的高溫滅菌

通常選用一百二十一度±3高壓滅菌十五分鐘，具體中 海培養(yǎng)基按食品微生物檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)的規(guī)范做好滅菌。培養(yǎng)基的體積不可高于一千毫升，不然將會(huì)影響滅菌時(shí)過(guò)熱。所有的培養(yǎng)基實(shí)際操作應(yīng)依照規(guī)范或使用方法做好。滅菌實(shí)際效果的操控是重要環(huán)節(jié)。加熱后，以適度的方式冷卻，以防止過(guò)熱。這針對(duì)大容量的敏感培養(yǎng)基極其關(guān)鍵，比如包含亮綠的培養(yǎng)基。

過(guò)濾器滅菌可以在真空或壓力下做好。使用孔徑為0.2微米的無(wú)菌設(shè)施和濾膜。對(duì)設(shè)施的所有的部份做好消毒或使用事先消毒的設(shè)施。有些過(guò)濾膜上附著有蛋白質(zhì)或其他物質(zhì)，如抗生素。以便實(shí)現(xiàn)有效的過(guò)濾，過(guò)濾膜應(yīng)當(dāng)事先用無(wú)菌水潤(rùn)濕。

查驗(yàn)經(jīng)濕熱滅菌或過(guò)濾滅菌的培養(yǎng)基，尤其是酸堿值/顏色/滅菌實(shí)際效果和均勻度。

㈦培養(yǎng)基的使用

⑴瓊脂培養(yǎng)基溶解

將瓊脂培養(yǎng)基倒入沸水浴中或利用具備相同實(shí)際效果的方式方法溶解，如高壓滅菌器中的層流蒸汽。高壓瓊脂培養(yǎng)基應(yīng)盡可能減少再加熱時(shí)長(zhǎng)，防止溶解后過(guò)熱。溶解后應(yīng)在常溫下短期置放兩分鐘，防止玻璃容器碎裂。

將溶解的培養(yǎng)基倒入四十七至五十度。恒溫水浴冷卻保溫，可依據(jù)培養(yǎng)基真實(shí)凝固溫度適度提高水浴溫度，一直到使用。培養(yǎng)基達(dá)到四十七度至五十度的時(shí)長(zhǎng)與培養(yǎng)基的品種及體積和數(shù)量相關(guān)。溶解的培養(yǎng)基要盡早使用，靜放時(shí)長(zhǎng)不可以高于四鐘頭。未使用的培養(yǎng)基不可再度固化用以以后使用。敏感培養(yǎng)基要特別重視，溶解后的保溫時(shí)長(zhǎng)要盡可能降低。若有特別要求，請(qǐng)參考特定規(guī)范。倒入試樣的瓊脂培養(yǎng)基溫度應(yīng)操控在四十五度上下。

⑵培養(yǎng)基除氧

需要時(shí)，將培養(yǎng)基倒入沸水浴或蒸氣浴中加熱十五分鐘后使用；加熱時(shí)松掉器皿的外蓋；加熱后蓋緊，快速冷卻至使用溫度如FT培養(yǎng)基。

⑶添加添加劑成分

當(dāng)培養(yǎng)基冷卻至四十七~五十度時(shí)，應(yīng)添加熱不穩(wěn)定添加劑。無(wú)菌添加劑在添加前要置放在常溫下，以防止冷液體影響瓊脂凝結(jié)或形成薄片。將培養(yǎng)基與添加的成分緩慢充分混合，并盡早分開包裝到預(yù)備器皿中。

⑷平板配制和保存

將溶解的培養(yǎng)基倒入皿中，在皿中形成厚度至少為三毫米、直徑為九十毫米的皿，通常添加十八毫升至二十毫升瓊脂培養(yǎng)基。平板扣上板蓋后，放置在水平面上冷卻凝固瓊脂。要是平板需要儲(chǔ)存或培養(yǎng)

要是時(shí)長(zhǎng)高于四十八小時(shí)或培養(yǎng)溫度高于四十度，則需要倒更多的培養(yǎng)基。凝固后的培養(yǎng)基應(yīng)該及時(shí)采用或貯藏于避光處及5度±3冰箱密封袋中，避免中海生物培養(yǎng)基成份產(chǎn)生變化。在平板的底端或側(cè)邊做標(biāo)識(shí)，主要包括名稱、制備日期和有效期。合適的培養(yǎng)基編碼系統(tǒng)也可用作標(biāo)識(shí)。

將倒入的平板放入密封袋中冷藏，可以延長(zhǎng)儲(chǔ)存期。為了避免冷凝水的產(chǎn)生，平板在放入袋中之前應(yīng)該冷卻。儲(chǔ)存前不能干燥培養(yǎng)基表面。針對(duì)表面接種培養(yǎng)的固體培養(yǎng)基，應(yīng)先將瓊脂表面干燥：揭開平板蓋，在25度~50度的烘箱或培養(yǎng)箱中倒置平板；或者放在有對(duì)流的無(wú)菌凈化站，直到培養(yǎng)基表面的水滴沒有了。當(dāng)心不能太過(guò)干燥。應(yīng)依據(jù)制造商給予的說(shuō)明采用商用平板瓊脂培養(yǎng)基。

㈧廢棄培養(yǎng)基

所有的被污染和未采用的培養(yǎng)基都要以安全可靠的方式并依據(jù)最新法律法規(guī)對(duì)其進(jìn)行正確處理。

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