伊紅美藍(lán)瓊脂培養(yǎng)基EMB原理配方用途方法
日期:2022-04-07 | 中海生物技術(shù)文庫(kù) | 瀏覽:2263 次
㈠伊紅美藍(lán)瓊脂培養(yǎng)基原理:
伊紅美藍(lán)瓊脂培養(yǎng)基算是弱選擇性培養(yǎng)基,英文簡(jiǎn)稱EMB培養(yǎng)基,通常用于分離鑒別腸道致病菌,尤其是大腸菌群和糞大腸菌群。蛋白胨供應(yīng)碳源\氮源\維生素\生長(zhǎng)因子等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì);乳糖是由大腸桿菌發(fā)酵的碳水化合物;磷酸氫二鉀是培養(yǎng)基pH緩沖劑;瓊脂是培養(yǎng)基的凝固劑;伊紅又稱曙紅或四溴熒光素,為酸性染料,美藍(lán)又稱亞甲藍(lán),為堿性染料。它們都被用作培養(yǎng)基中的鑒別指示劑,以抑制革蘭氏陽(yáng)性菌的生長(zhǎng)。
大腸桿菌分解乳糖產(chǎn)酸時(shí),細(xì)菌帶正電,因此被染成紅色,再與美藍(lán)結(jié)合,產(chǎn)生紫黑色菌落,有金屬光澤;產(chǎn)氣腸桿菌呈褐色,幾乎沒有金屬光澤。乳糖分解菌/沙門氏菌和志賀氏菌為乳糖發(fā)酵微生物,產(chǎn)生無(wú)色/透明或琥珀色菌落;凝固酶陽(yáng)性葡萄球菌是具有無(wú)色針尖的菌落;白色念珠菌是蜘蛛絲或羽毛菌落。不致病/乳酸不發(fā)酵的革蘭氏陰性菌也會(huì)在培養(yǎng)基上生長(zhǎng),需要通過其他的生化試驗(yàn)來(lái)分辨。
㈡伊紅美藍(lán)瓊脂培養(yǎng)基EMB配方:
成分(g/L) |
蛋白胨:10.0 |
瓊脂粉:14.0 |
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氯化鈉:5.0 |
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伊紅:0.4 |
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乳糖:10.0 |
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美藍(lán):0.065 |
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牛肉浸出粉:3.0 |
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溫度:25℃ | PH值:7.0~7.4 |
㈢伊紅美藍(lán)瓊脂培養(yǎng)基用途方法:
稱取中海伊紅美藍(lán)瓊脂培養(yǎng)基干粉37.4g克,添加1.0升蒸餾水或去離子水,攪拌加熱煮沸至完全溶解,在一百二十一度高壓滅菌十五分鐘后備用。
使用中海生物伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基鑒定水中大腸桿菌,具體操作流程如下所述:
⒈制作伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基,趁熱注入培養(yǎng)皿,濃縮成平板備用。
⒉取河水或溝水于高溫滅菌錐形瓶中,以1比10稀釋。
⒊在伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基上接種0.1毫升稀釋液。用劃線平板法分離。
⒋將劃線培養(yǎng)皿倒置,三十七度放置十八至二十四小時(shí)。培養(yǎng)基中會(huì)出現(xiàn)大腸桿菌菌落,深藍(lán)色黑色點(diǎn)有金屬光澤或無(wú)光澤。
⒌將菌落接種在斜面培養(yǎng)基上,由營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基制作而成。
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