系用大腸桿菌菌株滅活抗原接種健康兔，采血，分離血清，標(biāo)化，經(jīng)冷凍干燥制成凍干血清。

【性狀】本品為白色、淡黃色或淡紅色疏松團(tuán)塊。

【作用與用途】用于大腸桿菌O抗原血清型鑒定。

【用法與判定】

1．血清的稀釋

多價(jià)血清的配制：將多種大腸桿菌O抗原定型血清分別用0.5％石炭酸生理鹽水恢復(fù)原量（1mL）后混合，裝入青瓶，蓋緊。

單因子血清的配制：將一種大腸桿菌O抗原定型血清溶解于5mL 0.5％石炭酸生理鹽水（視為1：5稀釋?zhuān)b入小瓶，蓋緊。

2．抗原的制備

平板凝集抗原制備：將被檢菌株劃線(xiàn)接種于麥康凱瓊脂平板，置37℃培養(yǎng)24小時(shí)。在麥康凱瓊脂平板上挑選光滑圓整菌落，接種普通瓊脂斜面，37℃培養(yǎng)24小時(shí)。用1.5～2.0mL石炭酸生理鹽水將普通瓊脂斜面培養(yǎng)物全部洗下，收集于一小試管中，于121℃高壓2小時(shí)，破壞其“K”抗原。

試管凝集抗原制備：將被檢菌株劃線(xiàn)接種于麥康凱瓊脂平板，置37℃培養(yǎng)24小時(shí)。在麥康凱瓊脂平板上挑選光滑圓整菌落，接種普通瓊脂斜面，37℃培養(yǎng)24小時(shí)。取普通瓊脂斜面培養(yǎng)物接種普通肉湯培養(yǎng)基(100mL)，置37℃振蕩培養(yǎng)8～15小時(shí)。培養(yǎng)物于121℃高壓2小時(shí)，破壞其“K”抗原。

3．平板凝集反應(yīng)

抗原先與大腸桿菌O抗原多價(jià)定型血清進(jìn)行平板凝集反應(yīng)，然后再與大腸桿菌O抗原定型血清進(jìn)行平板凝集反應(yīng)。即抗原和血清各取50uL于玻璃板上混勻，涂成直徑約2cm的圓膜，1分鐘中內(nèi)出現(xiàn)明顯凝集顆粒判定為“陽(yáng)性”。同時(shí)以抗原與0.5％石炭酸生理鹽水混合物作對(duì)照，觀察有無(wú)自凝集現(xiàn)象。

4．試管凝集反應(yīng)  

在1排小圓底試管中先加稀釋液0.5%石炭酸生理鹽水，第1管加1.5mL，從第2管起各管加0.5mL，然后在第1管加入大腸桿菌O抗原定型血清(1:5)0.5mL，混勻后，從第1管吸取0.5mL，加入到第2管,依次作1:20、1:40、1:80、1:160、1:320……1:10240系列稀釋?zhuān)缓蟾鞴芗涌乖?/span>0.5mL，振蕩使血清和抗原充分混勻，放入37℃溫箱18～20小時(shí)，取出后在室溫靜置2小時(shí)，記錄每管的反應(yīng)情況。如凝集價(jià)高于或等于1：640（第5管）即可判定為“陽(yáng)性”。每個(gè)試驗(yàn)均應(yīng)設(shè)有被檢抗原+0.5%石炭酸生理鹽水對(duì)照。

  結(jié)果判定：

   “#”  ——液體完全透明，管底覆蓋明顯的傘狀凝集沉淀物。

   “+++”——液體略呈混濁，管底傘狀凝集沉淀物明顯。

   “++” ——液體呈中等程度混濁，管底有中等量傘狀凝集沉淀物。

   “+”  ——液體不透明或透明度不明顯，有不顯著的傘狀凝集沉淀物。

 “-”  ——液體混濁，無(wú)任何凝集沉淀物，細(xì)菌可能沉于管底，呈光滑圓盤(pán)狀，振蕩時(shí)呈均勻混濁。

最終結(jié)果判定：以“++”作為被檢抗原的效價(jià)終點(diǎn)。

 【規(guī)格】1ml/支

【貯藏與有效期】溶解后的血清在2～8℃保存，有效期為12個(gè)月。

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