瓊脂(Agar)有著特殊的熔點和凝固點，其成分無法被微生物分解利用，沒有抑制性成分。因而比較適合用以微生物培養(yǎng)基的配制，故此是固體培養(yǎng)基最經常使用的凝固劑。迄今為止，當今世界尚未有能完全取代瓊脂的替代物。

某些早期做植物組織培養(yǎng)或微生物培養(yǎng)的人，尤其是新手入門，在制備時常常會面臨培養(yǎng)基無法正常凝固的狀況:呈半流體或完全液態(tài)，與此同時會出現各種顏色。本篇文章中海生物技術將簡單闡述瓊脂的凝固性及影響其凝固性的主要因素，并根據不一樣的操作步驟做一個敘述式的評述，以方便更多人在實際工作過程中徹底解決相應問題，事半功倍。

㈠瓊脂基礎知識

瓊脂(Agar)又稱果凍粉，因其最開始是在日本藻類中提煉而被稱為洋菜。成品瓊脂為白色或淡黃色粉末或細條狀，具體由復雜的大分子多糖類組成。其水解產物由40%的D-半乳糖、3%硫酸鹽和2%丙酮酸組成。實際上是瓊脂糖和瓊脂糖的混合物。瓊脂膠是瓊脂糖的硫酸鹽，瓊脂糖具體借助氫鍵的引力構成網狀結構。因而，瓊脂糖凝膠的穩(wěn)定性好于哪些利用化學鍵交聯構成網絡結構的瓊脂糖凝膠，其凝結劑的穩(wěn)定性差。

瓊脂(Agar)溶于熱水而不溶于冷水，因而在制備培養(yǎng)基時須要煮沸瓊脂。伴隨著溫度的升高，瓊脂逐漸溶解，當溫度降至40℃時，開始凝固。制備培養(yǎng)基時須要注意的是，考慮到各地生產的瓊脂質量不一樣，同一濃度的瓊脂水溶液凝固后硬度/透明度/顏色均會有一定的不同。劣質瓊脂不光凝固性差，而且含有許多其它雜物。

㈡瓊脂凝固性知識

做為培養(yǎng)基的凝固劑，瓊脂的凝固性不光與瓊脂本身的質量相關，還受滅菌溫度/滅菌時間/瓊脂用量/pH值的影響。

①(0.7~0.8)%瓊脂水溶液冷卻后凝固良好。針對經常使用的微生物培養(yǎng)基，瓊脂的用量趨向于基本穩(wěn)定，通常條形瓊脂的用量為2左右，粉狀瓊脂的用量為(1~1.5)%。

②培養(yǎng)基的pH值對瓊脂的凝聚影響很大，在正常濃度范圍內是瓊脂能不能凝聚的主要因素。

③在4.302和120℃時影響不大。廷長高溫高壓滅菌時間或反復高溫高壓處理不會影響其凝固性。當pH為5.0-8.0較高時，瓊脂濃度是影響混凝度的具體原因。

④當制備的固體培養(yǎng)基的pH值小于3.44時，其凝固將決定于滅菌溫度/溫度/滅菌時間/瓊脂量和pH值。當中，滅菌溫度和時間與瓊脂凝固性呈負相關，瓊脂用量和pH值與瓊脂凝固性呈正相關。但在這些原因中，瓊脂的用量影響不大，因此在此類培養(yǎng)基的滅菌流程中，應掌握好滅菌溫度、滅菌時間和pH值。選用較低的滅菌溫度、較短的滅菌時間和適當提升培養(yǎng)基的pH值可以明顯提升瓊脂的凝固性。當pH值小于或等于4.0較低時，pH值是影響固化等級的關鍵原因。

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