易于引起Pcr實驗室污染四種關鍵因素概述
日期:2022-05-17 | 中海生物技術文庫 | 瀏覽:1301 次
Pcr實驗室最為普遍關鍵的污染因素,中海生物技術小編總結有下述四方面:
因素①Pcr試劑污染
關鍵因素是在配制Pcr試劑的過程中,樣品槍/容器/雙蒸水等溶液被Pcr核酸模板污染。
因素②Pcr擴增產物污染
它是Pcr反應中最重要并是最普遍的污染因素。畢竟Pcr產物的大拷貝量大概為1013拷貝/毫升,大大超過Pcr檢測幾個拷貝的極限,極少量的Pcr產物就能引起假陽性,產生假陽性。
另一種易于被忽略且最有可能導致Pcr產物污染的形式是氣溶膠污染。當空氣摩擦液體表面時,會產生浮質。當實際操作中劇烈搖動反應管時,開啟蓋子,吸取樣品,用污染注射槍反復吸取樣品,會產生氣溶膠并被污染。據測算,一個氣溶膠粒子可以包含48,000個拷貝,所以它引起的污染是一個需要特別留意的問題。
因素③標本之間的交叉污染
標本的污染主要包含采集標本的容器被污染,或標本置放時因密封不嚴而溢出容器外,或容器外有標準本粘著,引起標本之間的交叉污染;核酸模板提取過程中,加樣槍污染導致樣本間污染;部分微生物標本,尤其是病毒,可以隨氣溶膠傳播或產生氣溶膠,引起相互污染。
因素④克隆質粒的污染
此問題在分子生物學實驗室和部分克隆質粒作為陽性對照的實驗中也很普遍。由于單位體積克隆質粒的含量相當高,再加上純化過程需要更多的工具和試劑,活細胞中的質粒因其生長繁殖的簡單性和活力,很可能被污染。
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