【作用與用途】

布魯氏菌競爭ELISA抗體檢測試劑盒（Brucellosis Antibody Test Kit）用于檢測牛、羊血清中的布魯氏菌特異性抗體，用于血清學(xué)診斷。 

【檢測原理】

布魯氏菌競爭ELISA抗體檢測試劑盒采用競爭ELISA方法，在酶標(biāo)板微孔上預(yù)包被布魯氏菌抗原。在實驗中，加入稀釋后的待檢血清、酶標(biāo)二抗工作液、單克隆抗體工作液經(jīng)過溫育后，若樣品中含有布魯氏菌抗體，則與單克隆抗體競爭板孔中包被的抗原表位，酶標(biāo)二抗與單克隆抗體結(jié)合，形成布魯氏菌抗原-單克隆抗體-酶標(biāo)二抗復(fù)合物，溫育后將多余的游離抗體通過洗滌去除，在微孔中加入TMB顯色液，經(jīng)酶催化產(chǎn)生的藍(lán)色信號與樣品中的抗體含量成反比，加入終止液終止反應(yīng)后，用酶標(biāo)儀450 nm波長測定反應(yīng)孔中的吸光度OD值。

【主要成分與含量】

【需自備的材料】 

微量移液器、量筒、酶標(biāo)儀（450 nm）、去離子水、離心機(jī)（4000 rpm）、恒溫培養(yǎng)箱（37 ℃）、計時器等。

【用法與判定】

1、用法

1.1 試劑配制

洗滌工作液：使用前，濃縮的洗滌液應(yīng)恢復(fù)至室溫（20～25 ℃），并搖動，使沉淀溶解（最好在37 ℃恒溫培養(yǎng)箱中加熱5～10 min），然后用蒸餾水作10倍稀釋（例如：75 mL的濃縮洗滌液加上675 mL蒸餾水）混勻，稀釋好的洗滌液2～8℃可存放7日。

1.2 樣本處理

取動物全血，待血液凝固后，4000 rpm離心10 min，收集上清。也可以自然凝固析出血清，無溶血。

1.3 待檢血清和對照血清的稀釋

在血清稀釋板中按1:40稀釋待檢血清、陰性對照血清和陽性對照血清（如195 µL樣品稀釋液中加5 µL血清樣品），充分混勻。

1.4 操作步驟

① 取包被板（根據(jù)樣品多少，可拆開分次使用），將稀釋好的待檢血清、陽性對照血清和陰性對照血清分別加入到板孔中，50 μL/孔，其中陽性對照血清和陰性對照血清各加 2 孔。加樣結(jié)束后，再依次加入酶標(biāo)二抗工作液50 μL/孔，抗體工作液100 μL/孔。輕輕振勻孔中液體，蓋上蓋板膜，37 ℃溫箱中避光反應(yīng)30 min。

② 棄去孔中的溶液，每孔加入稀釋好的洗滌液300 µL，靜置1 min后，棄去洗滌液。洗滌4次后在吸水紙上拍干。

③ 將底物A液與底物B液按1:1混合，加入孔中，100 µL/孔，蓋上蓋板膜，37 ℃溫箱中避光反應(yīng)15 min。

④ 每孔加入終止液50 µL，5 min內(nèi)測定結(jié)果。

2、判定

在酶標(biāo)儀上讀各孔OD450nm值。

①試驗成立的條件：

陽性對照孔OD均值應(yīng)＜0.2，陰性對照孔OD均值應(yīng)＞1.0，試驗結(jié)果才有效；否則，應(yīng)進(jìn)行重復(fù)試驗。

② 計算方法：

PI（阻斷率）=100 % -（樣品OD值÷陰性O(shè)D均值）×100%

③ 陰陽性判斷：

PI≥30 %判為陽性，PI＜30%判為陰性。

【注意事項】

1、布魯氏菌競爭ELISA抗體檢測試劑盒使用前各試劑應(yīng)平衡至室溫。使用后放回2~8 ℃保存。

2、不同批號的試劑盒組份不得混用，不同試劑使用時應(yīng)防止交叉污染。

3、底物液和終止液不能暴露于強(qiáng)光或接觸氧化劑。

4、待檢血清數(shù)量較多時，應(yīng)先稀釋完所有待檢血清，再加到抗原包被板上，使反應(yīng)時間一致。

5、稀釋10×濃縮洗滌液時，如發(fā)現(xiàn)有結(jié)晶，應(yīng)加熱使其溶解后再使用。

6、移液時，應(yīng)盡量準(zhǔn)確，防止產(chǎn)生氣泡。

7、應(yīng)嚴(yán)格遵守各操作步驟規(guī)定的時間和溫度。

【貯藏與有效期】2～8℃避光保存，有效期為12個月。

【規(guī)格】96孔/盒；192孔/盒

【生產(chǎn)企業(yè)】  北京中海生物科技有限公司

              中海生物技術(shù)（棗莊）有限公司  

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